nahoru

Přehled

Absorpční a kolorimetrické testy jsou určeny k detekci nebo kvantifikaci množství určitého činidla v testu měřením množství světla absorbovaného činidlem nebo produktem chromogenní reakce při charakteristické vlnové délce. Tato vlnová délka je specifická pro měřené činidlo. Čím větší množství činidla je v jamce přítomno, tím více světla bude absorbováno. Mnoho kolorimetrických testů využívá „chromogenní“ (barvu produkující) substrát, který po přeměně na konečný produkt absorbuje světlo o specifické vlnové délce.

Příklady absorpčních testů zahrnují kolorimetrické testy ELISA (např. souprava Alliance p24), ELAST ELISA, testy, které používají chromogenní substráty (např. BCIP, DAB, 4CN a Fast Red), Bradfordovy testy, testy určené ke kvantifikaci na základě molárního extinkčního koeficientu látky a další absorpční a kolorimetrické testy.

Kolorimetrický test ELISA
Příklad kolorimetrického testu ELISA.

Top

Uvažování o deskách

Vlnová délka absorbance a spektrální vlastnosti desek

Testy, které měří absorbanci v oblasti viditelného světla (vlnové délky 400-900 nm), lze provádět na polystyrenových deskách s průhledným dnem. Testy, které měří absorbanci v ultrafialové oblasti (vlnové délky 200-400 nm), budou vyžadovat desky vyrobené z UV-transparentního materiálu (jako je sklo nebo cyklické olefinové kopolymery), aby se zabránilo absorpci světla samotným plastem.

Signál

Většina absorpčních (kolorimetrických) testů se provádí na čirých deskách, jako jsou mikrodesky SpectraPlate™. Je to proto, že čirá barva plastu by neměla rušit měření v oblasti viditelného světla (vlnové délky 400-900 nm). Čirý polystyrenový plast by neměl absorbovat světlo ve viditelném rozsahu.

Křížový hovor

Křížový hovor nastává, když absorpce ze sousední jamky ruší měření v jamce, která je předmětem zájmu, a někdy může být problematický u formátů destiček s vyšší hustotou (384jamek, 1536jamek). Použití destiček s průhledným dnem, které mají bílé stěny jamek (jako jsou mikrodestičky IsoPlate™ a ViewPlate®), může být užitečné, pokud je křížový přeslech problémem.

Nahoře

Mikrodestičky pro testy absorbance na bázi buněk

Výběr správné mikrodestičky pro test na bázi buněk bude záviset jak na konkrétní buněčné linii, která se v testu používá, tak na samotném protokolu testu. Mezi otázky, které je třeba při výběru desky zodpovědět, patří:

  1. Potřebuji sterilní desku ošetřenou tkáňovou kulturou?
  2. Musí být deska potažena?
  3. Má mít deska čiré nebo neprůhledné dno?

Úvahy o destičce
Zda je nutné použít sterilní destičku ošetřenou tkáňovou kulturou, závisí na době, po kterou budou buňky v testovací destičce. Při některých testech se buňky přidávají na mikrotitrační destičku a test je dokončen během několika minut až několika hodin. V jiných případech se buňky před provedením zkoušky pěstují v destičkách nejméně přes noc nebo se na ně působí sloučeninami delší dobu. Obecně se doporučuje, že pokud má být test proveden během jediného pracovního dne, není sterilní destička ošetřená tkáňovou kulturou nutná. Pokud budou buňky v destičce přes noc nebo déle, měla by se použít sterilní destička ošetřená tkáňovou kulturou a měly by se dodržovat aseptické techniky.

Potřeba destiček ošetřených tkáňovou kulturou nebo potažených závisí na konkrétních použitých buněčných liniích a na tom, jak budou buňky v průběhu testu ošetřeny. Buňky lze obecně rozdělit do tří tříd buněk:

  1. Silně adherentní buňky
  2. Slabě adherentní buňky
  3. Suspendované nebo neadherentní buňky

Naše sterilní mikrodestičky jsou všechny ošetřeny tkáňovou kulturou, aby se podpořilo uchycení a růst buněk. Proces ošetření tkáňových kultur zahrnuje vystavení polystyrenové mikrodestičky plazmovému plynu za účelem úpravy hydrofobního povrchu plastu tak, aby byl hydrofilnější. Výsledný povrch nese čistý záporný náboj v důsledku přítomnosti funkčních skupin obsahujících kyslík, jako jsou hydroxylové a karboxylové skupiny. Silně adherentní buňky se obvykle uspokojivě přichytí na desky ošetřené tkáňovou kulturou. Buněčné linie, které se přichytí méně silně, mohou vyžadovat desku s povlakem, jako je poly-D-lysin nebo kolagen, který podporuje přichycení lépe než pouhé ošetření tkáňovou kulturou. Buněčné testy využívající suspenzní buňky se obvykle provádějí na standardních destičkách ošetřených tkáňovou kulturou. Povlakované destičky se obvykle se suspenzními buňkami nepoužívají.

Kromě konkrétní buněčné linie používané v testu je při rozhodování o typu použité destičky důležitý i samotný protokol testu. Například testy využívající adherentní buňky mohou v protokolu zahrnovat výměnu kultivačního média nebo promývací kroky. V takových případech může být vhodné použít pro test potaženou destičku, aby se buňky během testu neoddělily od destičky.

Viz další informace o úpravě a potažení destiček.

Čiré dno vs. potah. neprůhledné destičky
Mikrodestičky s průhledným dnem mohou být užitečné pro testy založené na buňkách, protože umožňují mikroskopickou vizualizaci buněk pro sledování konfluence, morfologie a dalších parametrů, které mohou ovlivnit buněčnou odpověď v testu. Kromě toho testy, které jsou konfigurovány pro čtení ze dna, vyžadují desky s průhledným dnem.

Desky s průhledným dnem lze přeměnit na funkčně neprůhledné desky použitím těsnění BackSeal. Těsnění BackSeals jsou k dispozici v bílé nebo černé barvě (katalogové číslo 6005199 pro bílou barvu, katalogové číslo 6005189 pro černou barvu). Barva těsnění BackSeal by měla odpovídat barvě stěn jamek destiček.

Čiré mikrodestičky SpectraPlate™ TC
Ne všechny mikrodestičky SpectraPlate jsou sterilní/upravené pro tkáňové kultury. Pro buněčné testy využívající adherentní nebo suspenzní buňky hledejte produkty SpectraPlate označené jako „TC“ (tissue culture-treated). Mikrodestičky SpectraPlate jsou zcela průhledné a nemají žádnou barvu. Základna s průhledným dnem umožňuje mikroskopickou vizualizaci, což může být užitečné, pokud je nutné mikroskopické pozorování pro kontrolu hustoty a morfologie buněk. Základna destičky s průhledným dnem také umožňuje měření nahoře nebo dole. Tyto destičky jsou nabízeny v 96jamkovém i 384jamkovém formátu.

Výběrová tabulka pro buněčné absorpční a kolorimetrické testy
Tabulka
Popis
SpectraPlate™
  • Nabízí se v provedení pro tkáňové kultury-.ošetřené
  • Čirá destička
  • Čtečka destiček s horním nebo spodním čtením
  • Nabízena v 96jamkovém provedení, 384jamkových a 1536jamkových formátech

Tipy a nejčastější dotazy

Q. Jaké druhy víček mohu použít na talíře?
A. Destičky SpectraPlates s TC úpravou, stejně jako všechny mikrodestičky s TC úpravou od společnosti PerkinElmer, jsou dodávány s víčkem. Výjimku tvoří případy, kdy je destička s TC-kultivační úpravou zakoupena v balení po 200 kusech. V tomto případě se víčka s mikrodestičkami nedodávají a je třeba je zakoupit zvlášť. Pro 96jamkové destičky je katalogové číslo víčka 6005619 a pro 384jamkové a 1536jamkové destičky je katalogové číslo víčka 6007619. Víčka pro 96jamkové destičky mají kondenzační kroužky, které jsou zarovnány se základními jamkami. U těchto víček zůstává mezi víčkem a jamkou malý prostor. To je nezbytné, aby buňky mohly při růstu „dýchat“. Víčka by měla být před odečtením destičky odstraněna, aby nedošlo k poškození čtečky destiček.

Q. Mohu na destičky použít těsnění, nebo tím zabiju buňky?
A. Pokud již není problém s životaschopností buněk, lze použít lepicí těsnění na desky TopSeal-A™, katalogové číslo 6050185, které zabrání odpařování během inkubačních kroků. Plast lepicího těsnění TopSeal-A má některé spektrální vlastnosti, které mohou interferovat s testy prováděnými při absorpčních vlnových délkách. Před odečtem může být nutné těsnění z destičky odstranit. Pokud je v době potřeby těsnění problémem životaschopnost buněk, doporučujeme použít sterilní víčka destiček (pokud je třeba zachovat sterilní postupy) nebo prodyšné těsnění destiček (pokud lze do kultivačního média přidat antibiotika/antimykotika, aby se zabránilo kontaminaci). Prodyšná těsnění desek jsou k dispozici od různých dodavatelů, včetně společností Nunc® a Corning®.

Top

Mikrodestičky pro biochemické absorpční testy

Mikrodestičky pro standardní, in vitro absorpční/kolorimetrické testy, které nevyžadují ukotvení buněk nebo jiných činidel k povrchu destičky.

Mikrodestičky SpectraPlate
Destičky SpectraPlate jsou zcela průhledné. Základna s průhledným dnem umožňuje měření s odečtem shora nebo zdola. Tyto destičky jsou nabízeny ve formátech 96 jamek, 384 jamek (standardní nebo mělké jamky) a 1536 jamek.

Mikrodestičky ViewPlate™ a IsoPlate™
V případech, kdy může být problém s křížovými přeslechy (zejména ve formátech 384 jamek nebo 1536 jamek s vyšší hustotou), lze testovat mikrodestičky ViewPlate nebo IsoPlate s bílou stěnou. Tyto destičky jsou nabízeny se základnou s průhledným dnem, přičemž stěny každé jamky mají jednolitou bílou (nebo černou) barvu.

Výběrová tabulka pro biochemické absorpční a kolorimetrické zkoušky

.

Tabulka
Popis
SpectraPlate™
  • Čirá deska
  • Top- nebo spodní čtecí desky
  • Nabízí se v 96jamkovém provedení, 384jamkové, a 1536jamkových formátech
ViewPlate™
  • Čirá deska s bílými stěnami
  • Může být testována za účelem snížení křížového přeslechu při použití 384jamkovýchjamek a 1536jamkových formátů
  • Pro čtečky destiček se spodním čtením (při použití přístroje s horním čtením se doporučuje přidat BackSeal)
  • Nabízí se v 96jamkovém provedení, 384jamkové, a 1536jamkových formátech
IsoPlate™
  • Deska s čirým dnem a bílými stěnami
  • Pro čtečky desek se spodním čtením (pokud používáte přístroj s horním čtenímčtení, doporučuje se přidat BackSeal)
  • Nabízí se pouze ve formátu 96 jamek

Mikrodestičky IsoPlate s čirým dnem jsou podobné mikrodestičkám ViewPlate v tom, že dno destičky je čiré, zatímco stěny jednotlivých jamek jsou buď černé, nebo bílé. Díky tomu jsou mikrodestičky IsoPlate vhodné pro přístroje se čtecím dnem. Mezi mikrodestičkami IsoPlate a ViewPlate však existuje několik rozdílů. Destičky IsoPlates se vyrábějí tak, že se nejprve vytvaruje 96 čirých jamek najednou a poté se kolem čirých jamek vytvaruje černý nebo bílý rámeček. Díky tomu se bíle nebo černě zbarvená jamka rozšiřuje do stejné hloubky jako základna čiré jamky a může pomoci snížit křížové přeslechy při testech se spodním čtením. IsoPlates byly původně vyvinuty pro koincidenční počítání v radiometrickém detekčním přístroji MicroBeta® (čtení shora a zdola shodně). IsoPlates sice mají průhledné dno, ale nejsou ideální pro konfokální zobrazování (mikroskopická pozorování), protože optická průhlednost dna není tak dobrá jako u mikrodestiček CellCarrier™ Ultra nebo ViewPlate.

Tipy a nejčastější dotazy

Q. Jaký druh těsnění desek mohu pro své desky použít?
A. K zabránění odpařování během inkubačních kroků lze použít samolepicí těsnění desek TopSeal-A, katalogové číslo 6050185. Plast lepicího těsnění TopSeal-A má některé spektrální vlastnosti, které mohou interferovat s testy prováděnými při určitých absorpčních vlnových délkách. Před odečítáním může být nutné těsnění z destičky odstranit.

Q. Jaký druh víček mohu použít pro své destičky?
A. Průhledná nesterilní víčka, která se hodí k našim mikrodestičkám SpectraPlate a ViewPlate, lze objednat samostatně (katalogové číslo 6005617 pro 96jamkové destičky, katalogové číslo 6007617 pro 384jamkové nebo 1536jamkové destičky). Tato víčka ponechávají mezi víčkem a jamkou malý prostor, což může vést k odpařování po delší dobu. Víčka by měla být před odečtením destičky odstraněna, aby nedošlo k poškození čtečky destiček.

Top

Mikrodestičky pro testy s potaženou destičkou (včetně kolorimetrických ELISA)

Typy s potaženou destičkou, někdy označované jako „testy v pevné fázi“, vyžadují ukotvení jedné ze složek testu (proteinu, protilátky, vzorku atd.) na povrchu mikrodestičky. Testy s potahovanou destičkou používají promývací kroky k oddělení navázaných (asociujících) a nenavázaných (neasociujících) činidel z jamky destičky.

Mikrodestičky SpectraPlate HB
Mikrodestičky SpectraPlate s vysokou vazbou jsou nepotahované destičky, které jsou speciálně upraveny tak, aby umožňovaly pasivní přímé potahování protilátek, proteinů, vzorků a dalších biomolekul pomocí standardních postupů potahování destiček. Tyto destičky jsou zcela průhledné. Základna s průhledným dnem umožňuje měření shora nebo zdola. Tyto destičky jsou nabízeny v 96jamkovém a 384jamkovém formátu.

Výběrová tabulka pro kolorimetrické testy na potahovaných destičkách
Destička
Popis
SpectraPlate™ HB
  • Vysoce-.vazebná úprava pro protokoly přímého potahování destiček
  • Čirá destička
  • Čtečky destiček s horním nebo spodním čtením
  • Nabízeno v 96jamkových a 384jamkových formátech

Tipy a nejčastější dotazy

Q. Jaký druh těsnění desek mohu použít pro své desky?
A. K zabránění odpařování během inkubačních kroků lze použít samolepicí těsnění desek TopSeal-A, katalogové číslo 6050185. Plast lepicího těsnění TopSeal-A má některé spektrální vlastnosti, které mohou interferovat s testy prováděnými při určitých vlnových délkách absorbance. Před odečtem může být nutné těsnění z destičky odstranit.

Q. Jaký druh víček mohu pro své destičky použít?
A. Čirá nesterilní víčka, která se hodí k našim mikrodestičkám SpectraPlate, lze objednat samostatně (katalogové číslo 6005617 pro 96jamkové destičky, katalogové číslo 6007617 pro 384jamkové destičky). Tato víčka ponechávají mezi víčkem a jamkou malý prostor, který může časem vést k odpařování. Víčka by měla být odstraněna před odečtením destičky, aby nedošlo k poškození čtečky destiček.

Q. Máte nějaké návrhy protokolů pro potahování destiček, které mohu použít k navázání protilátky/vzorku na destičku?
A. Desky s vysokou vazbou lze potahovat jakoukoli standardní metodou potahování desek. Destičky lze potahovat pasivně podle níže uvedeného základního schématu:

  1. Protilátka, protein nebo vzorek (o koncentraci ~10 µg/ml nebo vyšší) se inkubuje na destičce přes noc v uhličitanovém pufru při vhodné teplotě (pokojová teplota nebo 4 °C). Zvolte teplotu, která pomůže udržet stabilitu potahované protilátky, proteinu nebo vzorku.
  2. Deska se třikrát promyje pufrem (např. 1X PBS).
  3. Deska se přes noc „zablokuje“, aby se pokryla zbývající plocha jamky (obvykle pomocí BSA, cukrů, jako je trehalóza nebo kasein, séra atd.)
  4. Před použitím destičky v testu se provede závěrečné promytí pufrem.

Pro více informací o potahování, blokování a skladování destiček doporučujeme tento odkaz:

Brown, M. C. (2011) Microtiter Plate Elisa, in Immunoassays in Agricultural Biotechnology (ed G. Shan), John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, NJ, USA. doi: 10.1002/9780470909935.ch4

Top

Těsnění destiček

PerkinElmer nabízí řadu těsnění destiček. TopSeal™ je řada těsnění destiček, která se aplikují na horní povrch destičky a používají se k zabránění odpařování nebo radioaktivní kontaminaci během inkubačních kroků testu a/nebo měření při odečítání z destičky. Těsnění TopSeal-A lze ponechat na destičce během luminiscenčních, AlphaScreen®, AlphaLISA®, AlphaLISA®SureFire® Ultra™ a radiometrických měření. Těsnění desek TopSeal mají spektrální vlastnosti, které mohou interferovat s jinými typy testovacích měření (absorpční testy, kolorimetrické testy, fluorescenční testy). U těchto typů testů byste měli porovnat měření na destičce s těsněním TopSeal a bez něj a otestovat, zda nedochází k interferenci. Těsnění desek BackSeal jsou těsnění desek, která se aplikují na dno desky. Těsnění desek BackSeal lze použít k utěsnění dna filtrační desky před přidáním scintilačního koktejlu, čímž se zabrání úniku. Těsnění desek BackSeal lze také použít ke změně desky s průhledným dnem na desku s bílým nebo černým dnem, aby se snížily křížové přeslechy při měřeních s horním čtením.

Těsnění desek
Výrobek
Typ těsnění
Deska. Formát
Počet plomb
Katalogové číslo
Těsnění-A Čiré lepicí těsnění Všechny 100 6050185
Čiré lepicí těsnění, pro 24jamkové desky 24jamkové 100 6005189
Černé samolepicí těsnění Všechny 100 6050173
TopSeal.B Přídavné těsnění pro PCR desky All 100 6050174
TopSeal-S Těsnění pro polystyrenové desky 96 jamek 100 6050192
BackSeal Bílé lepicí těsnění 96-, 384-jamka 55 6005199
Černé lepicí těsnění 96-, 384jamkové 55 6005189

Top

Služby pro zákaznické destičky u PerkinElmer

PerkinElmer nabízí služby pro zákaznické mikrodestičky, včetně:

  • Hromadné objednávání
  • Rychlé a flexibilní čárové kódování destiček
  • Biologické potahování destiček včetně – poly-D-lysinu, kolagenu, streptavidinu a potahování protilátek
  • Zakázkové úpravy včetně – tkáňových kultur, s vysokou vazbou bílkovin a s nízkou vazbou bílkovin
  • Zákaznická sterilizace

PerkinElmer nabízí také speciální balení a další potahy a úpravy mikrotitračních destiček. Pokud máte zájem o zákaznické služby týkající se destiček, obraťte se na naše týmy zákaznických služeb: OnPointSM Služby pro mikrodestičky na zakázku

Nahoře

Leave a comment

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.