top

Overview

Absorbancja i testy kolorymetryczne są przeznaczone do wykrywania lub ilościowego określania ilości określonego odczynnika w teście poprzez pomiar ilości światła pochłoniętego przez odczynnik lub produkt reakcji chromogenicznej przy charakterystycznej długości fali. Ta długość fali jest specyficzna dla mierzonego odczynnika. Im większa ilość odczynnika znajduje się w studzience, tym więcej światła zostanie zaabsorbowane. Wiele testów kolorymetrycznych wykorzystuje substrat „chromogenny” (wytwarzający kolor), który po przekształceniu w produkt końcowy będzie absorbował światło przy określonej długości fali.

Przykłady testów absorpcyjnych obejmują kolorymetryczne testy ELISA (takie jak zestaw Alliance p24), ELAST ELISA, testy wykorzystujące substraty chromogenne (takie jak BCIP, DAB, 4CN i Fast Red), testy Bradforda, testy zaprojektowane do ilościowego oznaczania w oparciu o molowy współczynnik ekstynkcji substancji oraz inne testy absorpcyjne i kolorymetryczne.

Kolorymetryczny test ELISA
Przykład kolorymetrycznego testu ELISA.

Top

Uwagi dotyczące płytek

Długość fali absorbancji i właściwości spektralne płytek

Zmiany, które mierzą absorbancję w zakresie światła widzialnego (długość fali 400-900 nm) mogą być przeprowadzane na płytkach polistyrenowych z przezroczystym dnem. Testy, które mierzą absorbancję w zakresie ultrafioletu (200-400 nm długości fal) wymagają płytek wykonanych z materiału przepuszczającego promieniowanie UV (jak szkło lub Cyclic Olefin Copolymers), aby uniknąć absorpcji światła przez samo tworzywo sztuczne.

Znak

Większość testów absorpcyjnych (kolorymetrycznych) jest przeprowadzana na przezroczystych płytkach, takich jak mikropłytki SpectraPlate™. Wynika to z faktu, że przezroczysty kolor plastiku nie powinien zakłócać pomiarów w zakresie światła widzialnego (długość fali 400-900 nm). Przezroczysty plastik polistyrenowy nie powinien pochłaniać światła w zakresie widzialnym.

Talk krzyżowy

Talk krzyżowy występuje wtedy, gdy absorpcja z sąsiedniej studzienki zakłóca pomiar studzienki będącej przedmiotem zainteresowania i może być czasami problematyczny w przypadku płytek o większej gęstości (384 studzienki, 1536 studzienek). Użycie płytek z przezroczystym dnem, które mają białe ścianki studzienek (takie jak mikropłytki IsoPlate™ i ViewPlate®) może być pomocne, gdy problem stanowi przejście krzyżowe.

Top

Mikropłytki do badań absorbancji opartych na komórkach

Wybór właściwej mikropłytki do badania opartego na komórkach będzie zależał zarówno od konkretnej linii komórkowej używanej w badaniu, jak i od samego protokołu badania. Pytania, na które należy odpowiedzieć przy wyborze płytki obejmują:

  1. Czy potrzebna jest sterylna, poddana obróbce w kulturze tkankowej płytka?
  2. Czy płytka musi być powlekana?
  3. Czy płytka powinna mieć przezroczyste czy nieprzezroczyste dno?

Rozważania dotyczące płytek
Czy konieczne jest użycie sterylnej, poddanej obróbce w kulturze tkankowej płytki zależy od czasu, przez jaki komórki będą znajdować się na płytce do analizy. W niektórych analizach komórki są dodawane do mikropłytki i analiza jest zakończona w ciągu kilku minut do kilku godzin. W innych przypadkach komórki są hodowane w płytkach co najmniej przez noc przed wykonaniem oznaczenia lub są poddawane działaniu związków chemicznych przez dłuższy czas. Jako ogólne zalecenie, jeżeli badanie ma być przeprowadzone w ciągu jednego dnia roboczego, sterylna płytka poddana obróbce w hodowli tkankowej nie jest konieczna. Jeżeli komórki mają pozostać na płytce przez noc lub dłużej, należy zastosować sterylną płytkę poddaną obróbce w hodowli tkankowej oraz przestrzegać technik aseptycznych.

Potrzeba stosowania płytek poddanych obróbce w hodowli tkankowej lub płytek powlekanych zależy od szczególnych wykorzystywanych linii komórkowych oraz od tego, w jaki sposób komórki będą poddawane działaniu związków w trakcie analizy. Komórki można zasadniczo podzielić na trzy klasy komórek:

  1. Komórki silnie przylegające
  2. Komórki słabo przylegające
  3. Komórki zawieszone lub nieprzylegające

Nasze sterylne mikropłytki są poddawane działaniu kultur tkankowych w celu promowania przyłączania i wzrostu komórek. Proces obróbki kultur tkankowych obejmuje wystawienie mikropłytki polistyrenowej na działanie gazu plazmowego w celu zmodyfikowania hydrofobowej powierzchni plastikowej, aby uczynić ją bardziej hydrofilową. Uzyskana w ten sposób powierzchnia ma ładunek ujemny netto ze względu na obecność grup funkcyjnych zawierających tlen, takich jak hydroksylowe i karboksylowe. Silnie przylegające komórki zwykle w zadowalający sposób przylegają do płytek poddanych działaniu kultur tkankowych. Linie komórkowe, które przylegają słabiej, mogą wymagać płytki z powłoką taką jak poli-D-lizyna lub kolagen, która sprzyja przyleganiu lepiej niż zwykłe traktowanie kulturą tkankową. Oznaczenia oparte na komórkach, wykorzystujące zawiesinę komórek, są zazwyczaj przeprowadzane na standardowych płytkach poddanych działaniu hodowli tkankowej. Powlekane płytki nie są zwykle używane z komórkami zawiesinowymi.

Oprócz szczególnej linii komórkowej używanej w badaniu, sam protokół badania jest ważny przy podejmowaniu decyzji o rodzaju płytki do użycia. Na przykład, analizy wykorzystujące komórki przylegające mogą obejmować zmiany podłoża hodowlanego lub etapy płukania w protokole. W takich przypadkach może być wskazane użycie do analizy płytki powlekanej, aby zapobiec odłączaniu się komórek od płytki podczas analizy.

Zobacz dodatkowe informacje na temat obróbki i powlekania płytek.

Płytki z przezroczystym dnem vs. płytki nieprzezroczyste
M. Nieprzezroczyste płytki
Mikropłytki z przezroczystym dnem mogą być przydatne do badań opartych na komórkach, ponieważ umożliwiają mikroskopową wizualizację komórek w celu monitorowania konfluencji, morfologii i innych parametrów, które mogą mieć wpływ na odpowiedź komórkową w badaniu. Ponadto, testy, które są skonfigurowane do odczytu dna wymagają płytek z przezroczystym dnem.

Płytki z przezroczystym dnem można przekształcić w funkcjonalnie nieprzezroczyste płytki poprzez zastosowanie uszczelnienia BackSeal. Uszczelki BackSeal są dostępne w kolorze białym lub czarnym (numer katalogowy 6005199 dla koloru białego, numer katalogowy 6005189 dla koloru czarnego). Kolor uszczelki BackSeal powinien pasować do koloru ścianek studzienek płytki.

Płytki SpectraPlate™ TC przezroczyste
Nie wszystkie płytki SpectraPlate są sterylne/ poddawane obróbce w kulturach tkankowych. Należy szukać produktów SpectraPlate oznaczonych jako „TC” (tissue culture-treated) do badań opartych na komórkach, wykorzystujących komórki przylegające lub w zawiesinie. Mikropłytki SpectraPlate są całkowicie przezroczyste i nie mają koloru. Przezroczyste dno pozwala na wizualizację pod mikroskopem, co może być pomocne, gdy wymagana jest obserwacja mikroskopowa w celu sprawdzenia gęstości i morfologii komórek. Przezroczyste dno płytki pozwala również na pomiary z odczytem górnym lub dolnym. Płytki te są oferowane zarówno w formacie 96-dołkowym, jak i 384-dołkowym.

Tabela wyboru do badań absorpcyjnych i kolorymetrycznych opartych na komórkach
Płytki
Opis
SpectraPlate™
  • Oferowane w hodowlach tkankowych – poddane obróbce
  • Płytki oferowane w formacie 96-dołkowym i 384-dołkowym.
  • Clear plate
  • Top- lub dolny czytnik płyt
  • Oferowane w wersjach 96-dołkowych, 384-dołkowych i 1536-dołkowych

Wskazówki i FAQS

Q. Jakiego rodzaju pokrywek mogę używać do moich talerzy?
A. Płytki SpectraPlates poddane obróbce TC, jak również wszystkie mikropłytki poddane obróbce TC firmy PerkinElmer, są dostarczane z pokrywką. Wyjątkiem jest sytuacja, gdy płytka poddana obróbce TC jest zakupiona w opakowaniu zawierającym 200 sztuk. W takim przypadku pokrywki nie są dostarczane z mikropłytkami i należy je zakupić oddzielnie. W przypadku płytek 96-studzienkowych numer katalogowy pokrywki to 6005619, a w przypadku płytek 384-studzienkowych i 1536-studzienkowych numer katalogowy pokrywki to 6007619. Pokrywy do płytek 96-dołkowych mają pierścienie kondensacyjne, które wyrównują się z leżącymi pod nimi dołkami. Pokrywki te pozostawiają niewielką przestrzeń pomiędzy pokrywką a dołkiem. Jest to konieczne, aby komórki mogły „oddychać” podczas wzrostu. Pokrywki należy zdjąć przed odczytem płytki, aby zapobiec uszkodzeniu czytnika płytek.

Q. Czy mogę użyć uszczelki na płytkach, czy to zabije moje komórki?
A. Jeśli żywotność komórek nie jest już problemem, można użyć samoprzylepnego uszczelnienia płytek TopSeal-A™, numer katalogowy 6050185, aby zapobiec parowaniu podczas inkubacji. Tworzywo sztuczne, z którego wykonana jest uszczelka samoprzylepna TopSeal-A, ma pewne właściwości spektralne, które mogą zakłócać wyniki badań przeprowadzanych przy absorpcyjnych długościach fal. Może być konieczne usunięcie uszczelnienia z płytki przed odczytem. Jeśli żywotność komórek jest problemem w momencie, gdy potrzebne jest uszczelnienie, zalecamy stosowanie sterylnych pokrywek do płytek (jeśli konieczne jest zachowanie sterylności) lub oddychających uszczelek do płytek (jeśli do podłoża hodowlanego można dodać antybiotyki/środki przeciwgrzybicze, aby zapobiec zanieczyszczeniu). Oddychające uszczelki do płytek są dostępne u różnych dostawców, w tym Nunc® i Corning®.

Top

Mikropłytki do biochemicznych testów absorpcyjnych

Mikropłytki do standardowych testów absorpcyjnych/kolorymetrycznych in vitro, które nie wymagają zakotwiczenia komórek lub innych odczynników na powierzchni płytki.

Mikropłytki SpectraPlate
Płytki SpectraPlate są całkowicie przezroczyste. Przezroczyste dno pozwala na pomiary z odczytem górnym lub dolnym. Płytki te są oferowane w formatach 96-dołkowych, 384-dołkowych (standardowych lub z płytką studzienką) i 1536-dołkowych.

MikropłytkiViewPlate™ i IsoPlate™
W przypadkach, w których może wystąpić problem z przesłuchami (szczególnie w formatach 384-dołkowych lub 1536-dołkowych o większej gęstości), można przetestować mikropłytki ViewPlate lub IsoPlate z białymi ściankami bocznymi. Płytki te są oferowane z przezroczystym dnem, z bokami każdej studzienki w jednolitym białym (lub czarnym) kolorze.

Tablica selekcyjna biochemiczne testy absorpcyjne i kolorymetryczne

.

Płytki
Opis
SpectraPlate™
  • Płytka przezroczysta
  • Czytniki z górnym or bottom-reading plate readers
  • Offered in 96-well, 384-dołkowym, i 1536-dołkowych
ViewPlate™
  • Płytka z przezroczystym dnem i białymi bokami
  • Możliwość testowania w celu zmniejszenia przesłuchów przy użyciu formatów 384i 1536 dołków
  • Do czytników płyt z odczytem dolnym (w przypadku używania urządzenia z odczytem górnym zaleca się dodanie uszczelki BackSeal)
  • Dostępne w formatach 96-dołkowych, 384-dołkowym, i 1536-dołkowych
IsoPlate™
  • Płytka z przezroczystym dnem i białymi bokami
  • Dla czytników płytek z odczytem dolnym (w przypadku używania urządzenia z odczytem górnym zaleca się dodanie uszczelki BackSeal)zalecane jest dodanie uszczelki BackSeal)
  • Dostępne tylko w formacie 96-dołkowym

Płytki IsoPlate z przezroczystym dnem są podobne do płytek ViewPlate, ponieważ dno płytki jest przezroczyste, podczas gdy boki każdej studzienki są albo czarne, albo białe. To sprawia, że mikropłytki IsoPlate są odpowiednie dla instrumentów z odczytem dolnym. Istnieje jednak kilka różnic pomiędzy mikropłytkami IsoPlate i ViewPlate. Płytki IsoPlate są wytwarzane przez formowanie 96 przezroczystych dołków na raz, a następnie formowanie czarnej lub białej ramki wokół przezroczystych dołków. Dzięki temu białe lub czarne dołki rozciągają się do tej samej głębokości, co podstawa przezroczystych dołków i mogą pomóc w zmniejszeniu wzajemnego przenikania w testach odczytu dolnego. Płytki IsoPlate zostały pierwotnie opracowane do zliczania koincydencji w instrumencie MicroBeta® z detekcją radiometryczną (zbieżny odczyt z góry i z dołu). Chociaż płytki IsoPlates mają przezroczyste dno, nie są idealne do obrazowania konfokalnego (obserwacji mikroskopowych), ponieważ przejrzystość optyczna dna nie jest tak dobra, jak w przypadku mikropłytek CellCarrier™ Ultra lub ViewPlate.

Porady i odpowiedzi na najczęściej zadawane pytania

Q. Jakiego rodzaju uszczelnienia płytek mogę użyć do moich płytek?
A. TopSeal-A, numer katalogowy 6050185, może być używany do zapobiegania parowaniu podczas inkubacji. Tworzywo sztuczne, z którego wykonano uszczelnienie samoprzylepne TopSeal-A ma pewne właściwości spektralne, które mogą kolidować z testami przeprowadzanymi przy pewnych długościach fal absorpcji. Może być konieczne usunięcie uszczelki z płytki przed odczytem.

Q. Jakiego rodzaju pokrywek mogę używać do moich płytek?
A. Przezroczyste, niesterylne pokrywki pasujące do naszych mikropłytek SpectraPlate i ViewPlate można zamówić oddzielnie (numer katalogowy 6005617 dla płytek 96-dołkowych, numer katalogowy 6007617 dla płytek 384-dołkowych lub 1536-dołkowych). Pokrywki te pozostawiają niewielką przestrzeń między pokrywką a dołkiem, co może prowadzić do parowania w dłuższych okresach czasu. Pokrywki należy usunąć przed odczytem płytki, aby zapobiec uszkodzeniu czytnika płytek.

Top

Mikropłytki do testów typu „coated-plate” (w tym kolorymetrycznych testów ELISA)

Czasami określane jako „testy fazy stałej”, testy typu „coated-plate” wymagają zakotwiczenia jednego ze składników testu (białka, przeciwciała, próbki, itp.) na powierzchni mikropłytki. Testy z płytkami powlekanymi wykorzystują etapy płukania w celu oddzielenia związanych (kojarzących się) i niezwiązanych (niekojarzących się) odczynników z dołka płytki.

Mikropłytki SpectraPlate HB
Mikropłytki SpectraPlate o wysokim wiązaniu są niepowlekanymi płytkami, które są specjalnie przygotowane, aby umożliwić pasywne, bezpośrednie powlekanie przeciwciałami, białkami, próbkami i innymi biomolekułami przy użyciu standardowych procedur powlekania płytek. Płytki te są całkowicie przezroczyste. Przezroczyste dno pozwala na pomiary z odczytem górnym lub dolnym. Płytki te są oferowane w formacie 96-dołkowym i 384-dołkowym.

Tabela wyboru dla testów kolorymetrycznych z płytkami powlekanymi
Płytki
Opis
SpectraPlate™ HB
  • Wysoki stopień wiązania dla protokołów bezpośredniego powlekania płytek.binding treatment for direct plate coating protocols
  • Clear plate
  • Top- or bottom-reading plate readers
  • Offered in 96-well and 384-well formats

Tips and FAQS

Q. Jakiego rodzaju uszczelki do płyt mogę użyć do moich płyt?
A. TopSeal-A, numer katalogowy 6050185, może być używany do zapobiegania parowaniu podczas inkubacji. Tworzywo, z którego wykonano uszczelnienie samoprzylepne TopSeal-A ma pewne właściwości spektralne, które mogą zakłócać testy wykonywane przy pewnych długościach fal absorbancji. Może być konieczne usunięcie uszczelki z płytki przed odczytem.

Q. Jakiego rodzaju pokrywek mogę używać do moich płytek?
A. Przezroczyste, niesterylne pokrywki pasujące do naszych mikropłytek SpectraPlate można zamówić oddzielnie (numer katalogowy 6005617 dla płytek 96-dołkowych, numer katalogowy 6007617 dla płytek 384-dołkowych). Pokrywki te pozostawiają niewielką przestrzeń pomiędzy pokrywką a dołkiem, co może prowadzić do parowania w czasie. Pokrywki należy zdjąć przed odczytem płytki, aby uniknąć uszkodzenia czytnika płytek.

Q. Czy macie Państwo jakieś sugerowane protokoły pokrywania płytek, których mogę użyć do związania mojego przeciwciała/próbki z płytką?
A. Płytki o wysokim wiązaniu mogą być powlekane przy użyciu dowolnej standardowej metody powlekania płytek. Płytki można powlekać pasywnie, stosując poniższy podstawowy zarys:

  1. Przeciwciało, białko lub próbka (o stężeniu ~10 µg/mL lub wyższym) jest inkubowane na płytce przez noc w buforze węglanowym w odpowiedniej temperaturze (temperatura pokojowa lub 4 °C). Należy wybrać temperaturę, która pomoże utrzymać stabilność powlekanego przeciwciała, białka lub próbki.
  2. Płytka jest przemywana trzykrotnie buforem (na przykład 1X PBS).
  3. Płytka jest „blokowana” przez noc w celu pokrycia powierzchni studzienki, która pozostaje (zwykle przy użyciu BSA, cukrów, takich jak trehaloza lub kazeina, surowicy itp.)
  4. Przepłukiwanie końcowe buforem przed użyciem płytki w badaniu.

W celu uzyskania więcej informacji na temat pokrywania płytek, blokowania i przechowywania, zalecamy następujące odniesienie:

Brown, M. C. (2011) Microtiter Plate Elisa, w Immunoassays in Agricultural Biotechnology (red. G. Shan), John Wiley & Sons, Inc, Hoboken, NJ, USA. doi: 10.1002/9780470909935.ch4

Top

Uszczelnienia płytek

PerkinElmer oferuje różnorodne uszczelnienia płytek. TopSeal™ to seria uszczelek do płytek, które są nakładane na górną powierzchnię płytki i są stosowane w celu zapobiegania parowaniu lub skażeniu radioaktywnemu podczas etapów inkubacji testów i/lub pomiarów odczytu płytek. TopSeal-A może być pozostawiony na płytce podczas pomiarów luminescencji, AlphaScreen®, AlphaLISA®, AlphaLISA®SureFire® Ultra™ i pomiarów radiometrycznych. Uszczelnienia płytek TopSeal mają właściwości spektralne, które mogą zakłócać inne rodzaje testów (testy absorpcyjne, testy kolorymetryczne, testy fluorescencyjne). W przypadku tych rodzajów testów należy porównać pomiar na płytce z uszczelnieniem i bez uszczelnienia TopSeal, aby sprawdzić, czy nie występują zakłócenia. Uszczelnienia płytek BackSeal to uszczelnienia płytek, które są nakładane na dno płytki. Uszczelnienia płytek BackSeal można używać do uszczelniania dna płytki filtracyjnej przed dodaniem koktajlu scyntylacyjnego, co zapobiega wyciekom. Uszczelnienia płytki BackSeal mogą być również stosowane do zmiany płytki z przezroczystym dnem na płytkę z białym lub czarnym dnem w celu zmniejszenia przesłuchów podczas pomiarów odczytu górnego.

Produkty z uszczelką płytową
Produkt
Typ uszczelki
Płyta Format
Liczba uszczelek
Numer katalogowy
TopSeal-.A Czysta uszczelka samoprzylepna Wszystkie 100 6050185
Czysta uszczelka samoprzylepna, do płytek 24-dołkowych 24-dołkowych 100 6005189
Czarna uszczelka samoprzylepna Wszystkie 100 6050173
TopSeal-.B Uszczelnienie do płytek PCR Wszystkie 100 6050174
TopSeal-.S Uszczelka termiczna do płyt polistyrenowych 96-dołków 100 6050192
BackSeal Biała uszczelka samoprzylepna 96-, 384-komorowa 55 6005199
Czarna plomba samoprzylepna 96-, 384-dołkowe 55 6005189

Top

Usługi dotyczące niestandardowych płytek w PerkinElmer

PerkinElmer oferuje usługi dotyczące niestandardowych mikropłytek, w tym:

  • Zamawianie hurtowe
  • Szybkie i elastyczne kodowanie kreskowe płytek
  • Pokrywanie płytek biologicznych, w tym – poli-D-lizyna, kolagen, streptawidyna i pokrywanie przeciwciałami
  • Obróbka niestandardowa, w tym – hodowla tkankowa, wysokie wiązanie białek i niskie wiązanie białek
  • Sterylizacja u klienta

PerkinElmer oferuje również specjalne pakowanie oraz inne powłoki i obróbki mikropłytek. Jeśli są Państwo zainteresowani niestandardowymi usługami dotyczącymi płytek, prosimy o kontakt z naszymi zespołami obsługi niestandardowej: OnPointSM Custom Microplates Services

Top

.

Leave a comment

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.